纯化水控制菌检查方法
验证方案及报告
文件编号：**VP*****-* 文件类别：验证
***********公司
验证方案批准
方案起草 质量管理部
方案审核 QC负责人 QA负责人 质量管理部负责人
方案批准 验证领导小组负责人 总经理
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签名 日期 签名 日期 签名 日期
验证小组人员名单
组长 姓名 职务/职称 成员 姓名
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部门 职务/职称 部门 目录
1、引言 ……………………………………………………….5 2、验证参与部门及责任……………………………………….5 3、验证方法…………………………………………………….5 文件要求……………………………………………………6 菌种…………………………………………………………6 菌液制备……………………………………………………6 验证方法……………………………………………………6 验证结果……………………………………………………7 4、结果判断……………………………………………………7 5、验证结论及评价……………………………………………8 6、验证报告批准书……………………………………………9
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1.引言 1.1 概述
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。当建立药品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证。 进行上述验证前，应首先对验证过程中使用的仪器、仪表及微生物限度检查的环境进行验证。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
除另有规定外，细菌培养温度为30-35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23-28℃；控制菌培养温度为35-37℃。 1.2验证目的
确认所采用的方法适合于纯化水的控制菌检查。 1.3验证执行的文件
超净工作台标准操作规程 微生物限度检查法 培养箱标准操作规程 热压灭菌锅标准操作规程 2. 验证参与部门及责任 序号 1 2 3 部门 质量管理部 设备工程部 质量管理部 职责 起草验证方案、组织实施验证 仪器仪表校验 设备、仪器操作，菌数的测定及结果判断 3.验证方法： 3.1文件要求 所需文件 内容 仪器仪表校验合格证 编号 存放地点 5 质检中心万级空气净化系统验证报告 超净工作台验证报告
培养箱验证报告 热风循环干燥箱验证报告 热压灭菌锅验证报告
检查人： 日 期：
3．2菌种
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 菌种类别 大肠埃希菌[CMCC （B）44 102] 传代次数 菌种保藏现状 金黄色葡萄球菌[CMCC （B）26 003] 确认人： 日期：
3．3菌液制备
3．3．1分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物少许，各接种至5ml营养肉汤培养基中，在36℃±1℃培养18-24小时，取均匀培养物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:107,制成每1ml含菌数为10~100cfu的菌悬液。其菌数在做验证试验的同时用营养琼脂平板涂布，经培养后计数确定。
制备人： 日期： 3．4验证方法
3．4．1试验组 取纯化水原液1ml和10~100 cfu试验菌加至100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，摇匀，过滤。取出滤膜接入100mlBL增菌培养基中，在36℃±1℃培养18-24小时，取上述培养物0.2ml，接种于含5mlMUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液。
3．4．2阴性对照组：设立阴性对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。方法同试验组，验证大肠埃希菌的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌。阴性对照菌不得检出。 3．4．3阴性对照 取0.9%无菌氯化钠溶液2ml,加入100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，过滤。按试验组培养检测。阴性对照应无菌生长。 3．5大肠杆菌检查法验证的测定结果：
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检测日期： 年 月 日至 年 月 日
菌类 大肠埃希菌
检测人： 复核人：
检测日期： 年 月 日至 年 月 日
菌类 大肠埃希菌
检测人： 复核人：
检测日期： 年 月 日至 年 月 日
菌类 大肠埃希菌
检测人： 复核人：
4结果判断
4．1阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。
4．2若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。
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试验所用菌种 大肠埃希菌 试验所用阴性对照菌 金黄色葡萄球菌 测定项目 BL增菌 MUG培养基管 MUG管加靛基质 麦康凯琼脂平板 试验组 阴性菌对照组 阴性对照 试验所用菌种 大肠埃希菌 试验所用阴性对照菌 金黄色葡萄球菌 测定项目 BL增菌 MUG培养基管 MUG管加靛基质 麦康凯琼脂平板 试验组 阴性菌对照组 阴性对照 试验所用菌种 大肠埃希菌 试验所用阴性对照菌 金黄色葡萄球菌 测定项目 BL增菌 MUG培养基管 MUG管加靛基质 麦康凯琼脂平板 试验组 阴性菌阴性对照 对照组 确认结果
确认人： 6.验证结论及评价报告
1、是否按规程内容完成，如未按规程进行 理由： 批准人： 2、主要试验结果： 项目 标准 验证结果 是否符合规定 大肠埃希菌1．阴性菌对照组不得检出阴 性对照菌。 检查法验证 2．若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。 3、结果的分析、建议 报告人： 年 月 日 4、会签 重要试验结果是否完整： 完整 欠缺 不合格 试验结果可靠性： 可靠 尚需重试 评价结果： 合格 不合格 会签人： 验证小组负责人： 年 月 日
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7、验证报告书批准 验证项目名称 验证目的 验证方案及验证报告编号 该验证项目及验证报告已经审核无误，予以批准。特此证明。 本验证项目有效期 自 年 月 日至 年 月 日止。 验证管理部门负责人签字： 年 月 日 企业盖章
纯化水控制菌检查验证方案及报告 确认所采用的方法适合于纯化水的大肠埃希菌检查。 **VP*****-* 9