司甲硫腺昔磷酸化酶在直肠癌组织中的转录表达及意义宋光延美孙善明曲红莹钟梅潍场毯学院附属潍坊市人民医院消化内科山东潍坊,’,,,月口初叨一,一,一,一瓜玫了,俄扣肠叩胡违历俄扣咭,叭旅叮妞狱《罗。妙‘。邵一一一,肠。讯讯脚。【,叮研究表明甲硫腺昔磷酸化酶叮,场、、岁口。术前患者均未接受放化疗治疗方法组织总。在人或鼠来源的多种恶性、细胞系和人类多种肿瘤如乳腺癌白血病骨肉瘤、。,提取,组织在液氮存在下试剂上海生工,腔癌子宫癌和肺癌等中有较高频率的纯合性缺失现象川国外有研究表明在肠癌中高表达而国内尚无相关的报道讨报道如下材料与方法材料,,研磨粉碎然后加人,混合℃,后室温放置加“,加人,,,的氯仿混匀乙醇洗,。本研究对此进行了初步研究探离心刃,取上清加人一异丙醇混遍室温,,匀后,离心干燥溶解后应用型紫外分光光度计测定浓度年月一值与纯度。储存于,标本为潍坊市人民医院,℃冰箱备用月手术切除的直肠癌患者的癌组织及相应的癌旁组反转录织取卜反转录酶上海生工每份组林。织新鲜标本存。例标本采集后立即置人液氮罐中保例女,总进行反转录反应体系为,,按,其中男例平均年龄年一,岁一照说明书加人各种试剂混匀后于。℃反应。作者简介〕宋光莹〔男汉族山东省临胸县人副主任医师学士学位主要研究方向临床消化内科学闷潍坊医学院学报年第卷第期卜℃终止反应。基因的分析将反转录产物进行反应,扩增引物为’一以一‘‘端引物,’一一’‘端引物。反应体系为林反转录产物林,上下游引物各闪卜,巧卜,酶,反应缓冲液卜,酶闪闪,去离子水补足闪。循环参数℃后,℃,℃,℃,个循环,最后℃延伸。以一为内参照,弓物序列为’一一‘‘端引物,‘一一‘‘端引物,退火温度在一℃之间均可,扩增个循环。扩增后产物取闪在琼脂糖凝胶上电泳,然后在紫外凝胶成像仪上观察照相,并利用相关软件分析图像,记录结果。统计学分析数据分析采用犷检验。结果标本及相应癌旁组织中的表达采用逆转录试剂盒获得的,在优化条件下对进行扩增。结果发现,基因在例肿瘤组织中有例呈高表达,有例肿瘤组织和例癌旁对照组组织都不表达,其余例癌旁对照组组织表达水平很低,在紫外灯下可以看见很弱的条带。的转录表达与直肠癌的相关性分析对例配对标本的逆转录一一结果进行统计学分析,发现在直肠癌组高表达率为,与癌旁组相比明显增高,两者差异有显著性。讨论直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,近年来随着人们生活习惯和饮食结构的改变,其发病率呈上升趋势。因而,直肠癌早期诊断及治疗具有重要的临床意义,通过提高早期直肠癌检出率,从而提高其术后年生存率。甲硫腺昔磷酸化酶’一斗,基因在正常细胞中是一个持家基因,是嗓吟和甲硫氨酸合成补救途径中一个关键的酶,属于嗦岭核昔磷酸化酶家庭的成员之一,其活性形式是同源三聚体,有碱基、甲硫核糖和琉基磷酸结合位点。其催化多胺代谢的副产物甲硫腺昔生成腺嚓吟等,最终生成,和甲硫氨酸,分别进人能量合成、合成和蛋白质合成系统。在正常细胞和组织中表达丰富,但是在人和鼠来源的多种恶性细胞系与人类多种肿瘤如白血病细胞中表达丧失或降低。世纪年代,研究发现在某些肿瘤来源的细胞系中缺乏磷酸化酶的活性,由此检测了一些临床标本,发现了相似的情况。世纪年代对的研究将之定位于人第号染色体上,随后该基因被精确定位于并克隆出的。片段’〕。附近区段有多个抑癌基因或与癌有关的基因,在基因朝向中心粒方向大约距离处依次排列着,,在处出现,使这个区域迅速成为研究热点。等囚研究表明,在肠癌中高表达,约,而在正常肠组织中无表达,而且的表达可能与的作用相关。本研究取例直肠癌标本观察的表达,一结果分析显示,在的癌标本中的表达明显高于癌旁组织,与国外报道基本一致。在多种肿瘤中表达缺失,而在直肠癌中高表达,且在正常肠组织中无表达或表达较低,这一发现可能有重要的临床意义。因此,今后应继续进行在直肠癌发生、发展机制中的分子生物学研究,探讨能否作为直肠癌的分子标识物以早期诊断,并结合临床影像学诊断手段,为患者进一步有效地施行选择性化学治疗提供有价值的信息。参考文献〕毗一叮叮罗,〔〕一缈、户中罗【」尸似咖夕月一叮而叮犯叮【」尸溉八恤名反刀一囚二呵二。,,,〔一」‘加心。叮众定翻心囚面阅一【收稿日期』折一