胶体金法、ELISA法检测HBsAg在献血者初筛中的作用

甘肃医药２０１４年第３３卷第２期Ｇａｎｓｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｍａｌ，２０１４，Ｖｏ１．３３。Ｎｏ．２　・１０３・　３讨论　脑缺血，最终导致认知功能障碍【４１。　根据本次研究显示，两组患者术后ＭＭＳＥ评分较　骨科手术一般创口较大，由于器官老化和冠心　术前显著下降，又于术后２４ｈ明显上升，但仍低于术　病、高血压、糖尿病等疾病，老年患者常发生认知功能　前评分。全麻组患者在术后６ｈ、１２ｈ评分明显低于硬　障碍、手术耐受性低等情况【　１。物主要以大脑为　膜外组，表明硬膜外麻组对认知功能的影响较全麻组　作用靶器官，通过阻断神经细胞膜上的电压门控性　更小。　Ｎａ＋通道使神经传导阻滞，产生麻醉作用。在以往认知　中，普遍认为患者麻醉过程结束后，经体内物　参考文献　代谢完毕可使大脑功能可以恢复到正常状态，并无丝　［１］夏燕飞，黄浩，周嘉莉，等．全身麻醉和硬膜外麻醉对老年骨科患者　毫副作用。然而，据最新研究证实，患者一旦经麻醉，　术后短期认知功能的影响［Ｊ］＿中华老年医学杂志，２０１２，３１（２）：　便会降低脑血流速度并造成大脑代谢异常，进而对中　１４４－１４６．　［２］冯昌盛，张玉龙，涂发平，等．两种不同麻醉方式对老年前列腺汽化　枢神经元和神经系统造成长期损害。关于影响机制，　术患者术后认知功能的影响［Ｊ］．重庆医学，２０１２，４１（３２）：３３８９—　一般认为有以下几点原因：①麻醉要会影响中枢神经　３３９０．　递质以及受体，进而使麻醉后学习、记忆等认知功能　［３］毕光焰，王世英，杨守衡，等．盐酸戊乙奎醚作为麻醉前用药对老年　受损；②神经元本身具有较强可塑性，长时间的增强　硬膜外麻醉患者术后认知功能的影响［Ｊ］．中国医药导刊，２０１２，１４　和抑制对神经元信号传递影响深远，极有可能导致认　（１）：４７—４８．　知功能障碍；③物除了具有麻醉特性，还会致　［４］魏昌伟，俞一瑾，倪新莉，等．不同麻醉方式对老年膝关节置换术患　者苏醒时间及认知恢复的影响［Ｊ］．重庆医学，２０１３，４２（９）：１０５４—　使神经细胞凋亡、改变神经细胞蛋白质表达进而导致　１０５６　胶体金法、ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ在献血者初筛中的作用　谢云冯惟萍李国英　【摘要】　目的：评价胶体金免疫层析法、酶联免疫法在献血者初筛检测中ＨＢｓＡｇ阳性的效果，指导采集安全的血液，减少血液　资源的浪费。方法：将经过金标法初筛后献血的所有血液样本，用两种ＥＬＩＳＡ试剂（一种为进口试剂、一种为国产试剂）检测，对有　反应性或在灰区（Ｓ／ＣＯ值≥０．５）的标本，确定为阳性样本共１５２份，再次用金标法检测。结果：再次经金标试纸条检测，阳性标本为　３５份，符合率为２３％。结论：胶体金法与ＥＬＩＳＡ法在ＨＢｓＡｇ的检测上有一定的符合性，说明ＥＬＩＳＡ的特异性较高，敏感性强，操作　方便；在献血者检测ＨＢｓＡｇ阳性确认中使用最为广泛和经典方法，胶体金法在献血者献血前的初筛中起到第一道屏障作用。　【关键词】　乙肝表面抗原；酶联免疫吸附法；胶体金免疫层析法　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—２７２５（２０１４）０２—０１０３—０２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ａｎｄ　ＥＬＩＳＡ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ＨＢｓＡｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒｓ　ＸＩＥ　Ｙｕｎ　ＦＥＮＧ　Ｗｅｉ－ｐｉｎｇ　ＬＩ　Ｇｕｏ—　ｉｒｎｇ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００４６，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｈｔｅ　ｅａｒｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＢｓＡｇ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｃｏｌｌｅｃｔ　ｓａｆｅ　ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｅ　ｔｈｅ　ｗａｓｔｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａｌｌ　ｂｌｏｏｄ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ａｆｔｅｒ　ｊｉｎｂｉａｏ　ｍｅｔｈｏｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ＥＬＩＳＡ　ｒｅａｇｅｎｔ（ｉｍｐｏｒｔｅｄ　ｒｅａｇｅｎｔ　ａｎｄ　ｄｏｍｅｓｉｔｃ　ｒｅａｇｅｎｔ）ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｄｅｆｉｎｉｔｅｄ　１５２　ｐｏｓｉｉｔｖｅ　ｓｐｅｃｉｍｅｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｓｐｅｃｉｍｅｎ　ｏｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｅｙ　ａｒｅａ（Ｓ／ＣＯ　ｖａｌｕｅ≥０．５）ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ａｇａｉｎ　ｂｙ　ｊｉｎｂｉａｏ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｉｔｖｅ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｗｅｒｅ　３５　ａｎｄ　ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　２３％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ＥＬＩＳＡ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｖｅ　ｃｅｒｔａｉｎｃｏｎｆｏｒｍｉｔｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨｂｓＡｇ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ＥＬＩＳＡ　ｈａｓ　ｈｉｇｈ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ，ｓｔｒｏｎｇ　．ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙ，ｅａｓｙ　ｔｏ　ｏｐｅｒａｔｅ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｍｏｓｔ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＢｓＡｇ　ｐｏｓｉｉｔｖｅ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒｓ，ａｎｄ　ｉｓ　ｃｏｎｆｉｒｍ　ａｎｄ　ｃｌａｓｓｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｉｓｒｔ　ｂａｒ６ｅｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｂｅｆｏｒｅ　ｂｌｏｏｄ　ｓｕｐｐｌｙ　ａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｈｅｐａｉｔｉｔｓ　Ｂ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ；ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ；ｏｌｌｏｉｄａｌ　ｇｏｌｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　本研究通过对３３０３９人份检测，筛选出两种　份，两种试剂共同检出阳性数为６０人份。看出ＥＬＩＳＡ　ＥＬＩＳＡ试剂最终检测阳性标本共１５２份，其中进口试　两种试剂（国产和进口试剂）在检测ＨＢｓＡｇ时有一定　剂检出阳性数为９２份，国产试剂检出阳性数为１２２　符合性（３９．４７％），也存在一定的差异性即互补性。　ＥＬＩＳＡ法是将酶的催化反应与抗原抗体的免疫学反应　作者单位：７３００４６甘肃兰州，甘肃省红十字血液中心检验科　结合起来的一种技术，由于其灵敏度高、特异性强、重　・１０４・　甘肃医药２０１４年第３３卷第１期Ｇａｎｓｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１４，Ｖｏ１．３３，Ｎｏ．１　复性好、易于自动化且无放射性污染等诸多优点成为　应用最广泛、发展最快的一种免疫测定技术【ｌ】。随着酶　联免疫试剂抗原抗体纯度的提高及试剂特异性增加，　传染性病原体传染性指标窗口期时间被缩短，同时由　于不同ＥＬＩＳＡ检测试剂盒检测灵敏度不同，同时受不　确定因素影响，不同试剂检出阳性率有差异，因此使　用不同厂家的两种试剂联合检测将对血液的安全更　３讨论　２０１１年卫生部组织开展的乙肝血清流行病学调　查显示，中国人群乙肝血清表面抗原（ＨＢｓＡｇ）携带率　仍接近８％，目前，采供血机构普遍采取初筛使用胶体　金试剂筛选献血者ＨＢｓＡｇ，起着第一道屏障作用。胶　体金法是采用胶体金标记Ｍｃ抗ＨＢｓ，以纤维素　加有保障。　ｌ材料和方法　１．１　标本来源甘肃省红十字血液中心２０１２年４月　１日至２０１２年１０月３１日的献血样本；阳性标本（本　实验室）、质控血清０．２ＩＵ／ｍｌ、０．５ＩＵ／ｍｌ（卫生部临检中　心）。　１．２仪器和试剂　ＦＡＭＥ全自动酶免检测仪和ＳＴＡＲ　加样机（美国）、进口ＥＬＩＳＡ试剂（美国雅培）、国产　ＥＬＩＳＡ试剂（厦门新创）、国产胶体金免疫试纸条（厦门　英科新创科技有限公司）。　１．３方法操作方法均严格按照说明书进行，ＥＬＩＳＡ　法检测标本为金标试剂初筛结果为阴性标本，ＥＬＩＳＡ　每次检测均用质控血清做质控，ＥＬＩＳＡ法检测结果以　任意一种试剂有反应性或在灰区（Ｓ／ＣＯ值Ｉ＞０．５）的标　本为筛检出的标本，筛出标本再使用胶体金试纸条重　复进行测试。　１．４统计学处理使用统计软件ＳＰＳＳ１３．０进行统计　分析，采用配对ｘ２检验进行统计处理。　２结果　用ＥＬＩＳＡ方法两种试剂（进口和国产）检测　ＨＢｓＡｇ阳性和灰区（Ｓ／ＣＯ值／＞０．５）标本为１５２份，其　中进口试剂检测阳性数为９２份，国产试剂检测阳性　数为１２２份，两种试剂共同阳性６０份，用胶体金法复　查阳性为３５份，胶体金检测（进口试剂）阳性标本符　合率为３８％，胶体金检测（国产试剂）阳性标本符合率　为２８％，胶体金检测与进口ＥＬＩＳＡ试剂比较差异具有　统计学意义（ｘ：＝４３．９３９，Ｐ＜０．０１）；胶体金检测与国产　ＥＬＩＳＡ试剂比较差异具有统计学意义（ｘ：＝９９．７００，　Ｐ＜０．０１）。见表１。　表１胶体金与ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ的结果　份　膜为载体进行层析检测ＨＢｓＡｇ的技术　，由于胶体金　法操作简单、快捷，不需要任何仪器，携带方便、干扰　因素较少　ｌ，可用于血清、血浆、全血标本，且其特异性　较ＥＬＩＳＡ法高，能避免由于抗原过量的标本出现的　“后滞现象”导致的弱阳性或假阴性，可单份标本测定，　检测耗时短，被一些医疗单位用作复查的方法…，如在　献血前不进行ＨＢｓＡｇ筛查，将会造成一定量血液的报　废，增加检测成本和风险。　经过ＥＬＩＳＡ法检测确认的阳性标本再次用金标　试纸条检测，出现阳性反应结果仍有３５份，这表明在　献血者献血前初筛ＨＢｓＡｇ时出现了胶体金试剂未检　测出的情况，其原因可能有以下几点，一是标本的状　态如采集的检测标本处于未抗凝或半抗凝状态、与采　集后送检的样本抗凝状态有一定的差别，且采用全血　检测；二是检测时间短而导致未检测出等，采血车检　测环境和实验室检测环境的不同，特别是在大型的单　位和学校献血情况下，环境温度和湿度的影响，三是　胶体金试剂检测方法的局限性，对一些ＨＢｓＡｇ亚型漏　检　。四是人为判断错误的因素影响，由于观察结果的　时间控制不严格，造成误判。　因此，在实际工作中应将ＥＬＩＳＡ法和胶体金法完　美的结合，发挥好每一种实验的作用，优化其方法的　互补性，使血液的安全性更加提升，减少和降低血液　的报废率，为患者提供优质的服务和安全的血液。　参考文献　［１］尤金兰．ＨＢｓＡｇ胶体金法与ＥＬＩＳＡ法对比分析［Ｊ］．中国误诊学杂　志，２０１２，１２（ｏ４）：８２７—８２９．　［２］何斌，贺钢枫肢体金试纸条与酶联免疫吸附法联合检测乙型肝炎　表面抗原对比分析［Ｊ］．内蒙古医学杂志，２０１１，４３（ｏ３）：３５０—３５１．　［３］邓涛．ＥＬＩＳＡ和胶体金法检测ＨＢＳＡＧ的实验比较［Ｊ］．首都医药，　２０１２，０３（下）：４９．　［４］何斌，贺钢枫．胶体金试纸条与酶联免疫吸附法联合检测乙型肝炎　表面抗原对比分析［Ｊ］．内蒙古医学杂志，２０１１，ｏ３（下）．４９．　［５］　陈敏．胶体金法与ＥＬＩＳＡ对乙型肝炎标志物检测效果的比较研究　［Ｊ］．中华全科医学，２０１２，１０（１２）：１９４４—１９４５．